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總一氧化氮檢測試劑盒

產(chǎn)品簡介：

總一氧化氮檢測試劑盒(Total Nitric Oxide Assay Kit, 即Nitrate/Nitrite Assay Kit)采用了硝酸鹽還原酶(Nitrate reductase)還原硝酸鹽(nitrate)為亞硝酸鹽(nitrite)，然后通過經(jīng)典的Griess reagent檢測亞硝酸鹽，從而測定出總一氧化氮。一氧化氮本身極不穩(wěn)定，在細(xì)胞內(nèi)很快代謝為硝酸鹽(Nitrate)和亞硝酸鹽(Nitrite)，通過上述方法檢測出硝酸鹽和亞硝酸鹽的總量，就可以推算出總的一氧化氮的量。

本試劑盒采用了NADPH依賴性硝酸鹽還原酶(NADPH dependent nitrate reductase)。高濃度的NADPH會干擾后續(xù)的檢測，消除NADPH的一種常用方法就是使用Lactate dehydrogenase (LDH)清除NADPH。本試劑盒采用了LDH清除NADPH的方法，使檢測結(jié)果更加準(zhǔn)確。

對亞硝酸鹽的檢測下限達(dá)到2微摩爾/升，在2-80微摩爾/升的范圍內(nèi)有很好的線性關(guān)系。濃度過高的樣品可以適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行檢測。

樣品范圍廣，可以檢測細(xì)胞裂解液、組織裂解液、細(xì)胞或組織的培養(yǎng)液、血清、血漿或尿液等中一氧化氮的含量。酚紅和10%血清對測定無明顯干擾。

樣品需要量少。根據(jù)樣品中一氧化氮的濃度不同，僅需0-60微升樣品。 檢測速度快，僅需約80分鐘即可完成檢測。

本試劑盒采用了間接的一氧化氮檢測方法，如需檢測細(xì)胞內(nèi)實(shí)際的一氧化氮水平一氧化氮含量，可以采用碧云天生產(chǎn)的DAF-FM DA (NO熒光探針)(S0019)。

保存條件：

-20℃保存一氧化氮含量，一年有效。NADPH，Nitrate Reductase，NaNO2 (1M)，Griess Reagent I 和Griess Reagent II需避光保存。NADPH配制成溶液后必須分裝并-70℃保存。

注意事項(xiàng)：

RPMI 1640等含有較高濃度硝酸鹽的培養(yǎng)液容易對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾，請盡量避免。必需使用RPMI 1640培養(yǎng)液時，在檢測一氧化氮前必需先換成其他適當(dāng)培養(yǎng)液例如DMEM、MEM、F12等甲醇檢測儀，或換成HBSS或PBS等。

推薦選購碧云天生產(chǎn)的細(xì)胞與組織裂解液(一氧化氮檢測用)(S3090)用于細(xì)胞或組織樣品的裂解。也可以自行選擇適當(dāng)方式制備細(xì)胞或組織樣品的裂解液用于總一氧化氮的檢測一氧化氮含量，但需注意自行選擇的方式可能會干擾試劑盒檢測時的酶反應(yīng)而影響檢測效果。檢測細(xì)胞或組織的培養(yǎng)液、血清、血漿或尿液中的總一氧化氮含量時有毒氣體報警器，不需要選購S3090。S3090裂解獲得的樣品還可以用于蛋白濃度的檢測以及Western印跡檢測，但需注意S3090中不含蛋白酶和磷酸酯酶抑制劑。 檢測反應(yīng)必須避光進(jìn)行。

由于檢測過程中有還原反應(yīng)，凡是影響還原反應(yīng)的氧化或還原試劑要注意避免，例如常用的還原劑DTT和巰基乙醇。 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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